MS培养基的配制与灭菌

MS培养基

MS培养基：Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。

MS培养基配方
成分 分子量 使用浓度(mg/L)
硝酸钾 KNO3 101.11 1900
硝酸铵 NH4NO3 80.04 1650
磷酸二氢钾 KH2PO4 136.09 170
硫酸镁 MgSO4.7H2O 246.47 370
氯化钙 CaCl2.2H2O 147.02 440

碘化钾 KI 166.01 0.83
硼酸 H3BO3 61.83 6.2
硫酸锰 MnSO4.4H2O 223.01 22.3
硫酸锌 ZnSO4.7 H2O 287.54 8.6
钼酸钠 Na2MoO4.2 H2O 241.95 0.25
硫酸铜 CuSO4.5 H2O 249.68 0.025
氯化钴 CoCl2.62 237.93 0.025

乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA 372.25 37.3
硫酸亚铁 FeSO24.7H2O 278.03 27.8

肌醇 100
甘氨酸 2
盐酸硫胺素 VB1 0.1
盐酸吡哆醇 VB6 0.5
烟酸 VB5或VPP 0.5
蔗糖 sucrose 342.31 30g/L
琼脂 agar 7 g/L

目前花卉组织培养中应用最多的为MS培养基。其组成是在配制1升（1000毫升）培养基时，加硝酸铵1.65克、硝酸钾1.9克、氯化钙0.44克、硫酸镁0.37克、磷酸二氢钾0.17克、碘化钾0.83毫克、硼酸5.2毫克、硫酸镁22.3毫克、硫酸锌3.6毫克、钼酸钠0.25毫克、硫酸铜0.025毫克、氯化钴0.025毫克、硫酸铁27.8毫克、蔗糖30克和琼脂7克。其他生长调节物质要根据花卉的种类和培养目的而确定。MS培养基中大量元素浓度过高，为此常采用1/2、1/4大量元素浓度作培养用，这样生长效果好。

配制培养基前要准备好三角瓶、试管、烧杯、量筒、吸和等玻璃器皿，预先称好药品。配制时先将琼脂溶化，再加入在水中深解的各种营养元素和蔗糖，然后用氢氧化钠或盐酸调整培养基的pH，一般掌握在5.7左右。以后可分注到养瓶中，盖好瓶盖。培养基配好要经高压灭菌。冷却后放到培养室预培养3天，如没有杂菌污染，才可进行花卉材料的接种。

一般按照配方配制的培养基，它的成分是不会有问题的；
那么培养基是否合格就只要检查一下是否灭菌彻底就可以了----把配制的平板放置在适宜的温度下，过一段时间（1天以上）看是否有杂菌长出，如果没有就是灭菌合格的平板（主要是芽孢杆菌、霉菌很难灭杀，可能造成污染）。

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培养基的配制：
1、称量和熬煮
按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。
2、加热溶解
把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。
3、分装
按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
4、加行塌棉塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。
5、包扎
加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
培养基配制注意事项：
1、培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。
2、PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。
3、调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。

4、培养基在使用时也可以做成不含琼脂的敏带改液体培养基，用于菌类的震荡培养。
5、培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.2g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。


扩展资料
培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素桥判）、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基。
根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等。
根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。
培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。配好后不宜久置，最好现配现用。
参考资料：百度百科-培养基

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